环特生物_斑马鱼实验模型
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斑马鱼实验模型

利用斑马鱼评价细胞凋亡

【评价原理】

细胞都有一个固定死亡的程序,细胞凋亡通过去除潜在的损伤细胞和分化后多余的细胞来保护机体,在脊椎动物中尤为重要。在斑马鱼DNA数据库中已鉴定出许多与哺乳动物同一家族的凋亡相关基因。这暗示了大部分凋亡通路在斑马鱼与高等脊椎动物的进化上有很高的保守性,因此,在凋亡的研究领域上,斑马鱼被认为是一种有效的实验动物模型。

吖啶橙(AO)能透过胞膜完整的细胞,嵌入细胞核DNA,使之发出明亮的绿色荧光。凋亡的细胞呈现为染色增强,荧光更为明亮,均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构。

基因组DNA断裂时,暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶的催化下加上荧光素 (FITC) 标记的dUTP (fluorescein-dUTP) ,从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测。

用两种不同的特异性荧光染色,均可以在荧光显微镜下观察到凋亡细胞。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组,分别是正常对照组和供试品组。供试品通过服用的方式摄入到斑马鱼体内(供试品通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。

服用一段时间供试品后,我们分别对斑马鱼整体做两种凋亡细胞特异性染色,用荧光显微镜观察细胞凋亡。

【结果展示】

斑马鱼凋亡表型图(AO染色)

图1. 斑马鱼凋亡表型图(AO染色)

黄色虚线区域为心脏,绿色小点为凋亡细胞

可以看到,供试品组的凋亡细胞荧光强度与正常对照组比较明显增强。

斑马鱼凋亡表型图(Tunnel染色)

图2. 斑马鱼凋亡表型图(Tunnel染色)

红色虚线区域为皮肤,红色小点为凋亡细胞

可以看到,供试品组的凋亡细胞荧光强度与正常对照组比较明显增强。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,供试品组斑马鱼出现凋亡细胞荧光强度比正常对照组明显增强。

2.本实验证实了供试品诱发斑马鱼细胞凋亡。