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斑马鱼实验模型
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利用斑马鱼模型评价血液毒性

【评价原理】

斑马鱼作为一种理想的人类血液毒性模型,是以其造血系统与人类造血系统在进化上高度保守性尾前提的。通过与人类造血类似的信号传导通路,斑马鱼形成了以包括红系、髓系、淋系及巨核系为主的造血系统。斑马鱼可建立多种血液系统毒性模型,主要包括红细胞、白细胞、出凝血障碍性毒性三大类,因此主要与斑马鱼中性粒细胞、巨噬细胞、红细胞和血流量相关。由于斑马鱼具有身体积小、实验周期短等优点,可以用作评估血液毒性的一种便捷模型。

转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼中性粒细胞自身发出荧光,可以直接在荧光显微镜下观察中性粒细胞个数;黑色素等位基因突变斑马鱼通体透明,经过巨噬细胞染色后可以直接在显微镜下观察巨噬细胞数量;利用邻联茴香胺将斑马鱼心脏红细胞染色,在显微镜下可以直接观察红细胞数量(信号强度)。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组,分别是正常对照组和供试品组(供试品通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。

处理结束后,(1)通过荧光显微镜观察并统计斑马鱼中性粒细胞数量;(2)通过染色斑马鱼巨噬观察巨噬细胞细胞数量;(3)通过邻联茴香胺染色心脏部位红细胞,在显微镜下观察心脏红细胞染色强度。

【结果展示】

斑马鱼中性粒细胞表型图

图1.斑马鱼中性粒细胞表型图

(绿色小点为中性粒细胞)

可以看到,供试品组中性粒细胞个数较正常对照组明显减少。

斑马鱼巨噬细胞表型图

图2.斑马鱼巨噬细胞表型图

(红色小点为巨噬细胞)

可以看到,供试品组巨噬细胞数量较正常对照组明显减少。

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图3.斑马鱼红细胞抑制表型图

(蓝色虚线框内为分析区域,分析红细胞染色强度)

可以看到,供试品组心脏红细胞染色强度较正常对照组明显降低。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,供试品组的中性粒细胞数量、巨噬细胞数量明显减少,红细胞染色强度明显降低。

2.本实验证实了此供试品诱发血液毒性。